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2019

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譜圖的那些異常事

作者：

譜圖的那些異常事

一、鬼峰

 

（1.）原因

①載氣不純，雜質(zhì)在低溫時(shí)凝聚，當(dāng)溫度升高時(shí)就會(huì)流出；

②前次進(jìn)樣殘留的高沸點(diǎn)組分峰流出；

③液體樣品中的空氣峰；

④樣品使色譜柱上以前吸附的雜質(zhì)解吸出來(lái)；

⑤樣品在進(jìn)樣口或色譜柱中高溫下分解；

⑥樣品被污染；

⑦高溫下或程序升溫時(shí)進(jìn)樣口隔墊分解；

⑧樣品與固定液或載體相互作用產(chǎn)生雜質(zhì)；

⑨玻璃棉或進(jìn)樣器帶入的污染物。

（2）解決之道

1、空白運(yùn)行時(shí)出現(xiàn)鬼峰

     通常在程序升溫過(guò)程中出現(xiàn)，是由于在相對(duì)較低的起始溫度下，柱頭會(huì)聚集污染物，隨著柱溫升高被釋放并在譜圖上表現(xiàn)出來(lái)造成。

    空白運(yùn)行或進(jìn)溶劑時(shí)出現(xiàn)鬼峰，可能是之前進(jìn)樣殘留的高沸點(diǎn)組分流出所致，這時(shí)多進(jìn)樣幾次空針或進(jìn)溶劑運(yùn)行，鬼峰就可以消失。

污染的進(jìn)樣口也可能導(dǎo)致鬼峰，因?yàn)闃悠窊]發(fā)或熱解以后會(huì)被吹掃進(jìn)入色譜柱，可嘗試降低進(jìn)樣口溫度，如果能消除或減弱鬼峰，則是進(jìn)樣口被污染導(dǎo)致，需要清洗進(jìn)樣口，更換襯管、密封圈和隔墊等。

2.純樣品進(jìn)樣時(shí)出現(xiàn)鬼峰

     當(dāng)純樣品進(jìn)樣時(shí)出現(xiàn)鬼峰，可先只用溶劑做一次空白運(yùn)行，原有的鬼峰沒(méi)有出現(xiàn)，則說(shuō)明該樣品受到污染，需要檢查樣品處理過(guò)程中潛在污染來(lái)源，如樣品提取、純化、轉(zhuǎn)移和存儲(chǔ)等環(huán)節(jié)；如果鬼峰仍然出現(xiàn)，那么鬼峰與該樣品無(wú)關(guān)。假設(shè)樣品是純凈的，出現(xiàn)鬼峰的一個(gè)常見(jiàn)原因是進(jìn)樣口過(guò)熱造成組分分解，這個(gè)問(wèn)題可以通過(guò)降低進(jìn)樣口溫度來(lái)確認(rèn)。

     在降低進(jìn)樣口溫度、減慢氣化速度不引起色譜峰展寬的前提下，應(yīng)盡可能使用低的進(jìn)樣口溫度來(lái)操作，避免出現(xiàn)高溫導(dǎo)致分解的情況；或應(yīng)使用揮發(fā)性更強(qiáng)的溶劑，極端情況下，分析之前應(yīng)對(duì)可能分解的樣品先進(jìn)行衍生化，降低進(jìn)樣口帶來(lái)的變異。

     金屬柱也可能導(dǎo)致樣品降解。此時(shí)，鬼峰往往比它們附近的峰要寬，因?yàn)檫@些鬼峰成分是在通過(guò)整個(gè)柱長(zhǎng)的過(guò)程中產(chǎn)生的。如果確認(rèn)這是產(chǎn)生鬼峰的原因，就有必要換成玻璃柱或熔融石英柱。

二、其他情況

1.拖尾峰（前沿陡峭，后沿較前沿 平緩的不對(duì)稱(chēng)峰）

 

1)  篩板阻塞，柱子兩頭的過(guò)濾篩板如果堵塞，樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過(guò)反沖色譜柱，或者更換篩板。

2) 色譜柱塌陷，是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

3) 有污染，即樣品不在同一起跑線(xiàn)起跑，從后面開(kāi)始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。

4) 流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤，如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對(duì)于堿性化合物，相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱(chēng)峰。

2.前沿峰

1) 樣品過(guò)載，被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來(lái)，形成前沿峰。降低樣品含量。

2) 樣品溶劑選擇不恰當(dāng)，當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。

3)  譜柱損壞，色譜柱柱效損失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。

4)  在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰，即大峰前包埋了沒(méi)有分開(kāi)的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。

3.基線(xiàn)漂移

1) 柱溫波動(dòng)，即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線(xiàn)的波動(dòng)，通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類(lèi)檢測(cè)器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器。

2) 流動(dòng)相不均勻，流動(dòng)相條件變化引起的基線(xiàn)漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級(jí)的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。

3) 流通池被污染或有氣體。用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

4) 流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化。更改配比或流速，為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

5) 樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)，以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

4.出現(xiàn)寬帶

1) 色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低。更換同樣類(lèi)型的色譜柱，如果新柱子可以提供對(duì)稱(chēng)的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。

2) 柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。

3) 檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大。減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通。

5.基線(xiàn)噪音

1) 在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣（尖銳峰）。流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。

2) 漏液。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。

3) 流動(dòng)相混合不完全。用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

4) 溫度影響（柱溫過(guò)高，檢測(cè)器未加熱）。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。

5) 在同一條線(xiàn)上有其他電子設(shè)備（偶然噪聲）。斷開(kāi)LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。 采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。

6.分離度不夠

1) 流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理。優(yōu)化梯度洗脫程序。

2) 流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）。重新配置流動(dòng)相。

3) 保護(hù)柱或分析柱阻塞。

去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析，如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱；如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖；如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颍蝗绻麊?wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。

7.色譜圖中未出峰

1) 系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解；

2) 泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；

3) 檢測(cè)器設(shè)置不正確；針對(duì)以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。

8.一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰

1) 流動(dòng)相吸收本底高；

2) 進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；

3) 樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。

9.所有峰均為負(fù)峰

1) 信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒；

2) 光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。

10.所有峰均為寬峰

1) 系統(tǒng)未達(dá)到平衡；

2) 溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；

3) 色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；

4) 色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；

5)  溫度變化造成的影響。

11.所出峰比預(yù)想的小

1) 樣品黏度過(guò)大；

2) 進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；

3) 檢測(cè)器設(shè)置不正確．定量環(huán)體積不正確；

4) 檢測(cè)池污染；

5) 檢測(cè)器燈出現(xiàn)問(wèn)題。

12保留時(shí)間變化

1) 柱溫變化: 柱恒溫；

2) 等度與梯度間未能充分平衡: 至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱；

3) 緩沖液容量不夠: 用>25mmol/L的緩沖液；

4) 柱污染: 每天沖洗柱；

5) 柱內(nèi)條件變化: 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相；

6) 柱快達(dá)到壽命: 采用保護(hù)柱；

13保留時(shí)間縮短

1) 流速增加: 檢查泵,重新設(shè)定流速；

2) 樣品超載: 降低樣品量；

3) 鍵合相流失: 流動(dòng)相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向；

4) 流動(dòng)相組成變化: 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀；

5) 溫度增加: 柱恒溫；

14保留時(shí)間延長(zhǎng)

1) 流速下降: 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡；

2) 硅膠柱上活性點(diǎn)變化 : 用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱；

3)鍵合相流失: 流動(dòng)相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向；

4)流動(dòng)相組成變化: 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀；

5)溫度降低: 柱恒溫

15肩峰

1)樣品體積過(guò)大: 用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%

2)樣品溶劑過(guò)強(qiáng): 采用較弱的樣品溶劑

3)柱塌陷或形成短路通道: 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

4)柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效: 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線(xiàn)過(guò)濾器,過(guò)濾樣品

5)進(jìn)樣器損壞: 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子

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