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2019

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微生物實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

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微生物實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

一、器皿的清洗與滅菌

1、滅菌前準(zhǔn)備
    所有需要滅菌的物品首先應(yīng)用純水清洗并晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)密，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開(kāi)。裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
2、裝放
（1）干熱滅菌器：裝放物品不可過(guò)擠，且不能接觸箱的四壁。
（2）大型高壓蒸氣鍋：：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過(guò)擠。

（3）堆放滅菌物體時(shí)，嚴(yán)禁堵塞安全閥和放氣閥的出氣孔，必須留出空位保證其空氣暢通，以免造成事故。

（4）滅菌液體時(shí)，應(yīng)將液體裝在硬質(zhì)的耐熱玻璃瓶中，體積不超過(guò)3/4，瓶口用棉花沙塞，勿使用沒(méi)打孔的橡膠或軟木塞。

（5）對(duì)于不同類型滅菌物，切勿一塊滅菌。

（6）物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無(wú)菌物品使用。   

（7）取出的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴(yán)禁與未滅菌物品混放。

（8）取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者或取出的物品掉落在地或誤放不潔這處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無(wú)菌物品使用。

（9）培養(yǎng)基或試劑等，應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達(dá)到者應(yīng)廢棄。

（10）啟閉式容器，在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉。

二、培養(yǎng)基制備

1、根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取，然后溶于蒸餾水中，在使用前對(duì)應(yīng)用的試劑藥品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。
2、PH測(cè)定及調(diào)節(jié)：PH測(cè)定要在培養(yǎng)基冷至室溫時(shí)進(jìn)行，因在熱或冷的情況下，其PH有一定差異，當(dāng)測(cè)定好時(shí)，按計(jì)算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測(cè)試一次。培養(yǎng)基PH值一定要準(zhǔn)確，否則會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)或影響結(jié)果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培養(yǎng)基的PH降低或升高，故不宜滅菌壓力過(guò)高或次數(shù)太多，以免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入。
3、培養(yǎng)基需保持澄清，便于觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，培養(yǎng)基加熱煮沸后，可用脫脂棉花或絨布過(guò)濾，以除去沉淀物，必要時(shí)可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干后使用，避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。
4、盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。
5、培養(yǎng)基的滅菌既要達(dá)到完全滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，一般121℃15min即可，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類、血清、明膠等，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。
6、每批培養(yǎng)基制備好后，應(yīng)做無(wú)菌生長(zhǎng)試驗(yàn)及所檢菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)。如果是生化培養(yǎng)基，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種培養(yǎng)，觀察生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈正常反應(yīng)，培養(yǎng)基不應(yīng)貯存過(guò)久，必要時(shí)可置4℃冰箱存放。
7、每批制備的培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑、滅菌情況及菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果、制作人員等應(yīng)做好記錄，以備查詢。

三、無(wú)菌操作要求 
1.接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。      
2.進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。       
3.接種樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?nbsp;     
4.進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用。        
5.從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。       
6.接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒。       
7.接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。
8.吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取。

9.菌間使用前后應(yīng)將門(mén)關(guān)緊， 打開(kāi)紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。      

10.處理和接種樣品時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)小窗傳遞。       

四、培養(yǎng)后滅菌

 

微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。
1、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。
2、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)121℃30min高壓滅菌。
3、染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒液體不得低于浸泡的高度）再經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。
4、涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后，煮沸洗滌。做凝集試驗(yàn)用的玻片或平皿，必須高壓滅菌后洗滌。
5、打碎的培養(yǎng)物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位，浸泡半小時(shí)后再擦拭干凈。
6.污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗(yàn)所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放入專用消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。

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